双链RNA纯化试剂盒

产品货号：

KL2201545

中文名称：

双链RNA纯化试剂盒

英文名称：

dsRNA Purification Kit

产品规格：

30T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

高分子量双链RNA（dsRNA）是许多RNA病毒复制的中间体，其出现是动植物和真菌RNA病毒感染的标志，因此，它是初步诊断此类病毒感染的靶分子。此外，将dsRNA用于NGS分析可以排除大量ssRNA的干扰，筛选新病毒的灵敏度更高。但从总RNA中分离dsRNA过程繁琐，为简化此环节，本公司开发了基于离心吸附柱的dsRNA纯化试剂盒。

产品应用：

本试剂盒可用于纯化各种来源的dsRNA，包括植物组织、真菌菌丝、动物组织、培养细胞、血清/血浆、细胞裂解液、病毒培养液等，也可以用于从IVT等反应物中纯化其中的dsRNA。

产品特点：

一站式，即开即用，用户不需要优化条件。
比HPLC更加简单快捷，直接从匀浆液中纯化dsRNA，整个过程通常在1小时内完成。
能有效去除ssRNA和DNA、蛋白质、盐类和其他杂质。
可以纯化30bp以上的dsRNA，长度无上限。
最大载量为5μg dsRNA，即低于5μg的dsRNA回收率可达80%。
本制品足够30次微量纯化，每次处理200mg左右的起始材料。
本制品仅适用于科研。

产品组成：

组分	规格	保存
去蛋白溶液	15mL	4℃
微量核酸沉淀剂	30mL	4℃
离心吸附柱	30套	室温
dsRNA提取液	15mL	-20℃
dsRNA上柱液	2.5mL
dsRNA纯化介质悬液	30mL
dsRNA洗涤液	30mL
dsRNA洗脱液	13mL

保存：按标签指示条件保存，有效期1年。

使用方法：
一、裂解液的制备

植物/真菌样本：取100～200mg鲜重植物叶组织或真菌菌丝体，用研钵在液氮中充分研磨成粉末，如果样本含多糖多酚，建议加入10mg自备的PVPP。然后加入500μL dsRNA提取液，转移到1.5mL离心管中，充分涡旋震荡混匀，放冰上5min，得裂解液。
动物组织：取100～200mg新鲜/冷冻动物组织（如肝、脾、肺等），用研钵和液氮研磨成粉，然后加入500μL dsRNA提取液，转移到1.5mL离心管中，充分涡旋震荡混匀，放冰上5min，得裂解液。
培养细胞：收集10⁶～10⁷个细胞，自备PBS洗涤后离心弃上清，重悬于500μL dsRNA提取液中，充分涡旋震荡混匀，放冰上5min，得裂解液。
血清/血浆/病毒培养液：取200～500μL样本，加入等体积dsRNA提取液，充分涡旋震荡混匀，放冰上5min，得裂解液。
从体外转录制备的RNA或其他体外反应制备的RNA中纯化dsRNA：灭活酶后直接乙醇-盐沉淀得总RNA，直接溶解在400μL dsRNA提取液中，加入80μL上柱液，混匀后进入第10步。

二、dsRNA的纯化

将裂解液转移至1.5mL RNase-free离心管中。
加入500μL去蛋白溶液，充分涡旋混合1分钟，14000×g离心3分钟，准确转移400μL上清液至新的1.5mL离心管中。去蛋白溶液含酚，注意不要溅到皮肤。准确转移400μL非常重要，不能改动，否则会影响效果。
如果上清液仍然浑浊，则重复此提取步骤，直到上清液澄清。
加入80μL上柱液，颠倒10次混匀，14000×g离心3分钟，将上清液转移至1.5mL离心管，放冰上待用。
在试剂盒提供的离心吸附柱中加入700μL dsRNA纯化介质悬液（加前需要颠倒10次将瓶中介质悬液混匀），14000×g离心1分钟，弃穿透液，得到的介质约350μL体积。
将第5/9步所得480μL上清液加入到离心柱中，盖上盖子，颠倒混匀，室温放置30分，每10分钟颠倒摇晃1分钟。
14000×g离心1分钟，弃穿透液。
加dsRNA洗涤液500μL，盖上盖子后颠倒1分钟混匀，10000×g离心30秒，弃穿透液。
重复上步操作1次。
将离心吸附柱置于RNase-free离心试管中，加入200μL dsRNA洗脱液，颠倒混匀1分钟，10000×g离心5秒，洗脱液即dsRNA溶液。
重复上步操作，还用同一个RNase-free离心试管收集穿透液。
向得到的400μL的穿透液（含dsRNA）中加入1mL微量核酸沉淀剂（用前颠倒10次混匀），14000×g离心15分钟，吸弃上清。
在离心管中加入1mL自备75%乙醇，颠倒10次后14000×g离心3分钟，小心弃上清。
短暂离心30秒后，将管底约50μL残留液体吸弃。
用自备超纯水溶解dsRNA沉淀，进行OD测定、电泳或其他后续分析。

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