产品货号：
KL2201545
中文名称：
植物/真菌样本双链RNA纯化试剂盒
英文名称：
dsRNA Purification Kit
产品规格：
30T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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高分子量双链RNA（dsRNA）的出现是植物和真菌中RNA病毒感染的标志。因此，dsRNA分析是初步诊断或表征新型RNA病毒的有力的工具。为此本公司基于纤维素粉末分离dsRNA的方法，利用微型离心柱开发了双链RNA纯化试剂盒。
- 通过离心步骤完成核酸的结合、洗涤和洗脱，无需复杂设备。
- 整个过程通常在1小时内完成。
- 可用于纯化双链RNA（dsRNA），适合多种样品类型，如植物组织、真菌菌丝、细胞裂解液等。
- 通过优化洗涤缓冲液和填料，能够有效去除蛋白质、盐类和其他杂质。
- 对于高酚类化合物样品（如含有大量木质素或单宁的植物），可能需要额外步骤（如加入PVPP）以去除杂质。
- 本制品仅适用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 40-100目的纤维素D | 10g |
| dsRNA洗涤缓冲液 | 30mL |
| 3M乙酸钠(pH5.2) | 1.2mL |
| dsRNA除杂剂 | 0.3g |
| dsRNA提取液 | 15mL |
| PCI混合液(pH4.5，25:24:1) | 30mL |
| 2×dsRNA洗脱液 | 13mL |
保存：-20℃，有效期1年。
一、微型离心柱设备的准备
- 在0.6mL塑料管底部用20号针头打孔，并套入2.0mL塑料管中。
- 装入500μL 50%(v/v)的纤维素悬浮液，并用dsRNA洗涤缓冲液平衡（用洗涤缓冲液平衡50%(v/v)的纤维素悬浮液，使用前10000×g离心5秒，去除柱中的洗涤缓冲液）。
二、dsRNA的提取
- 取100～200mg鲜重的叶组织或菌丝体，用研钵和液氮研磨粉碎。
- 加入500μL dsRNA提取液，以提取总核酸。
- 将粗提取物转移至1.5mL试管中。在粗提物中加入大约10mg dsRNA除杂剂。
- 在粗提取物中加入500μL PCI混合液，涡旋混合1min。将离心管以20000×g离心5分钟。如果上清液仍然浑浊，则重复此提取步骤（对于无包膜病毒，无需用PCI混合液进行提取纯化）。
- 将400μL上清液样品（总核酸）转移至新的1.5mL离心管中，然后加入80μL乙醇（终浓度16.6%）。对于琼脂糖凝胶电泳，可将12.5μL上清液用乙醇进行沉淀，作为核酸样品使用。
- 将上一步所得混合物以20000×g离心3分钟以去除可能堵塞柱子的沉淀物，并将上清液转移至预先制备的微型离心柱装置中。
- 将微型离心柱以10000×g离心5秒，留下大部分dsRNA以及一些与纤维素结合的ssRNA和DNA。弃去流出液。
- 向微型离心柱中加入dsRNA洗涤缓冲液400μL，以10000×g离心5秒，以去除与纤维素结合的ssRNA和DNA。弃去流出液。
- 重复第6步两次，最后一次洗涤后，10000×g离心5秒，以完全去除纤维素中的乙醇。
- 将0.6mL离心管置于另一个的2.0mL离心试管中，加入400μL 1×dsRNA洗脱液。以10000×g离心5秒。洗脱纯化的dsRNA，弃去0.6mL试管。
- 向得到的dsRNA溶液中加入40μL 3M乙酸钠和1mL 99.5%乙醇。
- 以20000×g离心5分钟，沉淀dsRNA。然后将沉淀的dsRNA样品溶解在20μL 2×dsRNA洗脱液中。
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